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CCK-8实验原理 |
Cell Counting Kit-8，简称 CCK-8 试剂盒，是一种基于 WST-8 而广泛应用于 细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。 CCK-8 溶液可以直接加入到细胞样品中，不需要预配各种成分。WST-8 在 电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色 的formazan。  WST-8 和 WST-8 formazan 的结构式 细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大， 则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅 (生成的 formazan 量) 和细胞数 目呈线性关系 。  CCK-8 的原理图 |
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CCK-8优势 |
WST-8 是 MTT 的一种升级替代产品，和 MTT 或其它 MTT 类似产品，如 XTT、MTS 等相比有明显的优点。第一，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原 生成的 formazan 不是水溶性的，需要有特定的溶剂来溶解；而 WST-8 和 XTT 、MTS 产生的 formazan 都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。第 二，WST-8 产生的 formazan 比 XTT 和 MTS 产生的 formazan 更易溶解。 第三，WST-8 比 XTT 和 MTS 更加稳定，使实验结果更可靠。第四，WST-8 和 MTT、XTT 等相比线性范围更宽，灵敏度更高，并且更加稳定。 WST-8 对细胞无明显毒性。加入 CCK-8 溶液显色后，可以在不同时间反复 用酶标仪读板，检测时间更加灵活，便于确定最佳测定时间。  |
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客户验证 |
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CCK-8实验步骤 |
试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物 等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。 
CCK-8 试剂盒检测细胞活性 注：如果待测药物有氧化性或还原性，可在加入 CCK-8 之前更换新鲜培养基，去掉待测药物的影响。当待测药物影响比较小的情况下可以不更换培 养基，直接扣除培养基中加入待测药物后的空白吸收即可。 |
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储存方式 |
4°C保存一年；-20°C保存2年；长期保存，建议避光 |
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实验注意事项 |
1. CCK-8 的培养时间一般为 1-4 小时，但在培养 30 分钟左右即可取出肉眼 观察显色程度，根据细胞种类而定，需要摸索条件，CCK-8 的最佳反应时 间以具体显色的最佳时间为准。 2. 使用 96 孔板进行检测时，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问 题。一方面，由于 96 孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的 PBS 、水或培养液；另一方面，可以把 96 孔板置 于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。 3. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，所以还原剂 (例如一些抗氧 化剂) 会干扰检测，如果待检测体系中存在较多的还原剂，需设法去除。 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。 4. 加入药物中如含有金属，对 CCK-8 显色有影响。终浓度为 1 mM 的氯化 亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制 5% 、15% 、90% 的显色反应，使灵敏度降 低。如果终浓度是 10 mM 的话，将会 100% 抑制。 5. 培养基中的酚红不会影响实验结果，酚红的吸光度可以在计算时，通过 扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。 6. 本产品可以检测 ，但不能检测酵母细胞。向 100 μL 培养液 中加入 10 μL CCK-8 溶液，并培养 1-4 小时或过夜。 7. CCK-8 试剂对细胞的毒性非常低。它和活细胞内的脱氢酶持续反应使溶 液颜色不断加深，OD 值不断增加 (注: 活细胞内的脱氢酶是持续产生的) 。 8. 要测定细胞的具体数量，建议同时做标准曲线。 9. 建议采用多通道移液器，以减小平行孔间的差异。 10. 以下方法可以终止 CCK-8 反应 (96 孔板) ： (a). 在显色反应后，将培养板放置 4°C 冰箱内。(b). 每孔加 10 μL 0.1 M HCl 溶液。(c). 每孔加 10 μL 1% (w/v) 的 SDS (十二烷基硫酸钠) 溶液。 注意：反应停止后，应在 24 小时内测定。 11. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不 得用于食品或药品。 12. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 |
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CCK-8实验原理 |
Cell Counting Kit-8，简称 CCK-8 试剂盒，是一种基于 WST-8 而广泛应用于 细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。 CCK-8 溶液可以直接加入到细胞样品中，不需要预配各种成分。WST-8 在 电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色 的formazan。 WST-8 和 WST-8 formazan 的结构式 细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大， 则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅 (生成的 formazan 量) 和细胞数 目呈线性关系 。 CCK-8 的原理图 |
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CCK-8优势 |
WST-8 是 MTT 的一种升级替代产品，和 MTT 或其它 MTT 类似产品，如 XTT、MTS 等相比有明显的优点。第一，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原 生成的 formazan 不是水溶性的，需要有特定的溶剂来溶解；而 WST-8 和 XTT 、MTS 产生的 formazan 都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。第 二，WST-8 产生的 formazan 比 XTT 和 MTS 产生的 formazan 更易溶解。 第三，WST-8 比 XTT 和 MTS 更加稳定，使实验结果更可靠。第四，WST-8 和 MTT、XTT 等相比线性范围更宽，灵敏度更高，并且更加稳定。 WST-8 对细胞无明显毒性。加入 CCK-8 溶液显色后，可以在不同时间反复 用酶标仪读板，检测时间更加灵活，便于确定最佳测定时间。 |
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CCK-8实验步骤 |
试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物 等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。
CCK-8 试剂盒检测细胞活性 注：如果待测药物有氧化性或还原性，可在加入 CCK-8 之前更换新鲜培养基，去掉待测药物的影响。当待测药物影响比较小的情况下可以不更换培 养基，直接扣除培养基中加入待测药物后的空白吸收即可。 |
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储存方式 |
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实验注意事项 |
1. CCK-8 的培养时间一般为 1-4 小时，但在培养 30 分钟左右即可取出肉眼 观察显色程度，根据细胞种类而定，需要摸索条件，CCK-8 的最佳反应时 间以具体显色的最佳时间为准。 2. 使用 96 孔板进行检测时，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问 题。一方面，由于 96 孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的 PBS 、水或培养液；另一方面，可以把 96 孔板置 于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。 3. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，所以还原剂 (例如一些抗氧 化剂) 会干扰检测，如果待检测体系中存在较多的还原剂，需设法去除。 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。 4. 加入药物中如含有金属，对 CCK-8 显色有影响。终浓度为 1 mM 的氯化 亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制 5% 、15% 、90% 的显色反应，使灵敏度降 低。如果终浓度是 10 mM 的话，将会 100% 抑制。 5. 培养基中的酚红不会影响实验结果，酚红的吸光度可以在计算时，通过 扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。 6. 本产品可以检测 ，但不能检测酵母细胞。向 100 μL 培养液 中加入 10 μL CCK-8 溶液，并培养 1-4 小时或过夜。 7. CCK-8 试剂对细胞的毒性非常低。它和活细胞内的脱氢酶持续反应使溶 液颜色不断加深，OD 值不断增加 (注: 活细胞内的脱氢酶是持续产生的) 。 8. 要测定细胞的具体数量，建议同时做标准曲线。 9. 建议采用多通道移液器，以减小平行孔间的差异。 10. 以下方法可以终止 CCK-8 反应 (96 孔板) ： (a). 在显色反应后，将培养板放置 4°C 冰箱内。(b). 每孔加 10 μL 0.1 M HCl 溶液。(c). 每孔加 10 μL 1% (w/v) 的 SDS (十二烷基硫酸钠) 溶液。 注意：反应停止后，应在 24 小时内测定。 11. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不 得用于食品或药品。 12. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 |
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